15/12/2009 · Kategori: bilelim-bildirelim
Bu test çok kullanılır, ancak ne anlama geldiği pek bilinmez!
Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay = Enzim Takılmış Antikor Deneyi
Bunun esasını şöyle özetleyebiliriz: Örneğin AIDS etkeni olan HIV için bir ELISA tasarlamış olsak şunları yapmamız gerekir:
-
HIV (antijen), bir fareye veya tavşana enjekte edilir.
-
Fare/tavşan, buna karşı bir antikor üretir. (Buna birinci antikor deniliyor!)
-
Bu antikorlardan en fazla olanı IgG' dir. Bunlar saflaştırılır ve örneğin keçiye enjekte edilir.
-
Keçi de bu IgG' ye karşı antikor üretir. (Buna ikinci antikor deniliyor!)
-
İkinci antikora bir enzim bağlanır, örneğin at turpu peroksidazı (HRP).
-
Antijen, bir plastiğe sabitlenir.
-
Hastadan, kan alınır ve serumu elde edilir.
-
Serum, bu antijen ile buluşturulur. Kişide HIV varsa (Kişide 1. antikorlar var demektir!) bu antijene bağlanır.
-
Daha sonra öndeden üretilip enzim bağlanmış 2.antikorlar ortama konur.
-
2.antikorlar, kişinin 1.antikorunu tanır ve tutunur.
-
Ortama, renksiz bir bileşik olan ABTS eklenir.
-
Bu bileşik peroksidazın (yani enzimin) substratıdır.
-
Enzim+İkinci antikor+birinci antikor+substrat = Renk değişimi (yeşil renk) gözlenir.
-
Bu aralarda, bağlanmayan antikorların uzaklaştırıldığı yıkama basamakları var; onlardan bahsetmiyoruz!
-
Burada enzim, substrattan H iyonlarını uzaklaştırır ve bu iyonları H2O2 (hidrojen peroksit) alır; su oluşur. Renk değişimi bu sayede olmuş olur.
-
Bu renk değişimi sonucun (+) olduğuna işaret eder.
İşte enzim kullanıldığından ve bu enzim kovalent olarak bağışıklık (immüno) sistemine ait hücrelere bağlanılarak kullanıldığından bu ismi alır: ELISA = ETAD
Türkçemize sahip çıkalım, sahibimiz olmasın!